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ATCC細胞篩選時的常用技術講解

發布時間: 2021-09-14  點擊次數: 1465次
   ATCC細胞的說明書中有關于細胞復蘇和傳代的詳細步驟。除說明書外,還有另一份重要文件-COA(Certificate of Analysis)。COA中包含具體批次信息,如每管細胞的數量,建議復蘇使用的培養基用量,已知細胞的傳代代次等重要信息。
  部分培養基如DMEM,各廠商提供產品雖然名稱相同,但成分也會有差異。為了保證細胞大的復蘇率和維持細胞特性,建議購買細胞的時候,同時購買ATCC細胞的培養基。
  篩選ATCC細胞株的兩種技術介紹:
  1.轉染質粒后,單克隆方法篩選穩定細胞系
  對大多數細胞轉染效率較低。對于基因過表達,如果轉染效率達到40%,基因過表達尚可。但是對于基因干擾實驗,對轉染效率要求遠遠高于基因過表達,通常質粒轉染無法滿足。
  另外,質粒游離于細胞質中,很快降解,無法滿足較長時間的檢測項目;質粒轉染整合幾率極低,穩定細胞株構建耗時耗力,且得率很低,往往需要挑取單克隆株。
  2.病毒感染篩選穩定ATCC細胞株
  病毒感染方法較質粒轉染篩選單克隆方法更方便和高效,是目前主流的穩定細胞系篩選方法。用慢病毒制備穩轉細胞株,由于其高效整合、高效轉錄、高效表達、宿主范圍廣,感染效率高,且與細胞染色體整合而不發生基因重排,是制備穩定細胞株的理想載體。




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